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分光光度計(jì)的基本原理及種類分光光度計(jì)

2010-10-21

                                                         分光光度計(jì)的基本原理及種類分光光度計(jì)
　
一、日常維護(hù)做好儀器的日常維護(hù)保養(yǎng)工作,也是用好一臺(tái)儀器的關(guān)鍵。
    分光光度計(jì)是一種高阻儀器,所以怕潮濕,過高的空氣濕度將影響儀器的穩(wěn)定性和電安全性,環(huán)境濕度一般控制在<85%。溫度對(duì)儀器也有一定影響,因儀器燈源本身具有熱量。當(dāng)工作一段時(shí)間后,儀器本身溫度會(huì)增加,當(dāng)環(huán)境溫度過高時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響儀器讀數(shù)的穩(wěn)定性和使用壽命。實(shí)驗(yàn)室的溫度一般控制在10℃～25℃之間。在日常維護(hù)工作中要定期更換儀器的硅膠,定期開機(jī),這樣才能保證儀器的正常使用和測(cè)量數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠。
二、比色器的選用分光光度計(jì)的比色皿若選用不當(dāng)也會(huì)給分析工作帶來較大誤差。
   一般紫外光區(qū)用石英比色皿,可見光區(qū)用玻璃比色皿。石英比色皿可用在全波段,玻璃比色皿只能用于340nm以上波長,因?yàn)椴ＡР煌缸贤夤狻Ｊ褂弥械谋壬髸?huì)受污染,其配套性會(huì)變差。所以當(dāng)發(fā)現(xiàn)配套性變差后要及時(shí)清洗,污染嚴(yán)重的要用重鉻酸鉀洗液清洗。當(dāng)兩個(gè)比色皿在檢定配套性時(shí)其透射比之差小于0.5%透過率時(shí),就要考慮重新配套或更換比色皿。另外,每次裝入比色皿的溶液不要過滿,一般裝2/3即可,并在每次倒溶液時(shí)應(yīng)小心操作,減少對(duì)進(jìn)光面的擦洗次數(shù),以防進(jìn)光面磨損而影響透過率。分光光度計(jì)是計(jì)量?jī)x器,必須定期檢定或校準(zhǔn),若經(jīng)修理后必須重新檢定,經(jīng)檢定合格后方可使用。 　　
三、分光光度計(jì)的基本原理及種類分光光度計(jì)是理化分析中常用的儀器。
    它的基本原理是建立在光與物質(zhì)相互作用的基礎(chǔ)上,當(dāng)光子和某一溶液中吸收輻射的物質(zhì)分子相碰撞時(shí),就發(fā)生吸收,測(cè)量其吸光度值的大小可反映某種物質(zhì)存在的量的多少。光的吸收程度與濃度有一定的比例關(guān)系,這就是著名的比直定律。該定律成立的必要條件是單色光(單一波長光)照射樣品。
    為了使該定律具有良好的線性,對(duì)測(cè)量濃度有一定的范圍要求。也就是吸光度值控制在0.2～0.7之間,并且要求單色光垂直照射樣品,試樣要均勻。一臺(tái)性能優(yōu)良的分光光度計(jì),必須有一個(gè)高性能的光路系統(tǒng)即單色儀。
單色儀有兩類:
    一類是以玻璃三棱鏡為色散元件組成;另一類是由光柵為色散元件組成。
    兩種單色儀各有利弊,用石英玻璃做成的單色儀,在紫外光區(qū)有較高的色散率,波長精度較高,分辨率可達(dá)0.2nm,但在可見光區(qū)要大于2nm,波長精度不線性,像751G型分光光度計(jì),是由光柵做成的單色儀,在全段波長(200nm～800nm)之間具有相同的波長精度。但目前大部分光柵或分光光度計(jì)所用的光柵都是復(fù)制光柵,波長精度不太高,如754、722、752型分光光度計(jì),波長精度在±2nm。如制藥廠采用定波長測(cè)量,需要強(qiáng)吸收峰,這時(shí)就要采用波長精度較高的儀器,否則很難測(cè)準(zhǔn)大吸收值,所以儀器的選用要根據(jù)工作要求。近幾年出現(xiàn)了不少帶單片機(jī)的分光光度計(jì),數(shù)據(jù)處理和操作功能大大加強(qiáng),但基本原理沒有變。